دراسة حيوية وجزيئية للفطور الممرضة التابعة للجنس Taphrina على اللوزيات في سورية

اسم الباحث :ناهد علي بدّور

المشرف :الدكتور حسن خليل +الدكتورة سلام لاوند

العنوان : دراسة حيوية وجزيئية  للفطور الممرضة التابعة للجنس Taphrina  على اللوزيات في سورية

العنوان باللغة الإنكليزية :A Vital and Molecular Study of Pathogenic Fungi of The Genus Taphrina on Stone Fruit in Syria

العام :2021

القسم :وقاية النبات 

الملخص :تسبب بعض أنواع الجنس Taphrina  spp أمراضاً خطيرة على اللوزيات، ويعد مرض تجعد أوراق الدراق المتسبب عن الفطر Taphrina deformans من الأمراض العالمية الخطيرة جداً، ويؤدي إلى خسائر كبيرة في الإنتاج في بعض السنوات.

نُفِّذَ هذا البحث في مختبرات كلية الزراعة ومركز التقانات الحيوية في جامعة البعث وفي مختبر التقانة الحيوية في كلية الزراعة بجامعة دمشق خلال الفترة  2014-2020, وهدف إلى عزل الفطريات الممرضة التابعة للجنس Taphrina من أنواع مختلفة من اللوزيات المزروعة في سورية, ودراسة العوامل المختلفة المؤثرة في نموها مخبرياً, والكشف عن الفطر T. deformans باستخدام الطرائق الجزيئية.

أظهرت نتائج الدراسة أن مرض تجعد أوراق الدراق المتسبب عن الفطر T. deformans  هو المرض الأهم من بين مجموعة الأمراض التي يسببها الجنس  Taphrina على اللوزيات في المناطق المدروسة وخاصة على اللوز والدراق.

لُوحظت أعراض نادرة الحدوث لمرض تجعد الأوراق المُتسبّب عن الفطر T. deformans  على أشجار المشمش في ربيع عام 2019 في منطقة صافيتا (قريتي بطارش– حكر مخيبر) محافظة طرطوس– سورية, وعلى الرغم من ورود بعض الإشارات والمشاهدات حول هذا المرض في سورية، إلا أن هذا يعد التسجيل الأوّل لهذا الفطر على المشمش ليس فقط في سورية، بل في المنطقة العربيّة بأكملها.

عُزل الفطر الممرض  T. deformansعلى المستنبت الغذائي بطاطا دكستروز آغار Potato–Dextrose-Agar ((PDA, واختُبر تأثير درجة الحرارة و درجة pH المستنبت المغذي وتركيب المستنبت المغذي في نمو ثلاث عزلات من الفطر, تم عزلها من أوراق اللوز(T.l)، و الدراق (T.d)، و المشمش (T.m).

أظهرت نتائج اختبار تأثير درجات الحرارة (5º, 15º, 25º, 20º, 30º, 35º) س في معدل نمو ثلاث عزلات للفطر T. deformans، أن درجة الحرارة المثلى لنمو الفطر كانت 15° س تلتها 20° س ثم 25° س, ولم يلاحظ نمو للعزلات الثلاث في درجات الحرارة 5, 30, 35° س.

وأظهرت نتائج اختبار تأثير قيم مختلفة من pH المستنبت المغذي (4.5, 5, 5.5, 6, 6.5 ,7, 7.5, 9,8) في معدل نمو ثلاث عزلات للفطر أنه يفضل النمو في المستنبتات الحامضية (4.5, 5, 5.5) وأظهرت العزلات المختبرة أقل نمو عند درجة pH (8, 9). واختلفت متوسطات قطر مستعمرة الفطر معنوياً فيما بينها باختلاف قيمة درجات الحرارة و درجة الـ pH, في حين لم تظهر فروق معنوية بين العزلات الثلاث المختبرة.

ولدى دراسة تأثير بعض المستنبتات المغذية وهي مستنبت بطاطا دكستروز آغار (PDA)،  مستنبت مستخلص المالت آجار (MEA)، مستنبت مستخلص الخميرة سكروز آجار (YESA)، مستنبت مستخلص المالت ببتون آجار(MEPA)، مستنبت مستخلص الخميرة مالت آجار (YMA)، مستنبت الآجار المغذي (NA)، مستنبت مسحوق أوراق اللوز الجافة آجار (ALA) في نمو ثلاث عزلات من الفطر T. deformans, وكذلك تأثير إضافة بعض المواد إلى المستنبت PDA وهي (غلوكوز, سكروز, سوربيتول, نشاء, ببتون),  تبين أن المستنبتين PDA وALA حققا أفضل معدلات نمو لكل العزلات المختبرة, إذ تراوح معدل النمو ( 32.83- 33.33) مم في المستنبت PDA و (32.00- 33.83) مم للمستنبت ALA لمدة تحضين 7 أيام تلتهما المستنبتات الأخرى. ووجد أن إضافة الغلوكوز للمستنبت PDA يعطي نمواً مثالياً للفطر إذ بلغ معدل النمو (26.56- 27.61) مم, يليه السكروز والببتون.

اختبر في هذا البحث تأثير المبيدين الفطريين أوكسي كلوريد النحاس  Copper oxychlorid وكابتان Captan  بالتراكيز ( 100، 500، 1000) جزء بالمليون في النمو القطري لثلاث عزلات محلية من الفطر  T. deformans مخبرياً. كان للمبيد أوكسي كلوريد النحاس تأثيرٌ تنشيطيٌّ في نمو العزلات المدروسة عند التركيز 100 جزء بالمليون فقد تراوحت نسبة التنشيط بين 10.44- 14.81 %. وأدى التركيز 500 جزء بالمليون إلى تثبيط نمو العزلات بنسبة 66.80- 69.62%, وارتفعت هذه النسبة لتصل إلى 100% عند التركيز 1000 جزء بالمليون.

لم يكن للمبيد كابتان تأثيراً معنوياً في نمو العزلات المدروسة عند التركيز 100 جزء بالمليون, وكان له تأثيرٌ  تثبيطيٌّ عند التركيز 500جزء بالمليون وصل إلى 60.74-66.80% ومع ارتفاع التركيز حتى1000  جزء بالمليون تراوحت نسبة التثبيط بين 90.01 – 94.29%.

تم الكشف عن الفطر  T .deformans باستخدام تقانة التفاعل التسلسلي للبوليميراز (PCR)  لأول مرة في سوريا في 6 عينات للفطر من أوراق لوز ودراق مصابة ومن مستعمرات نقية للفطر.

وأظهر حساب النسبة بين قراءات تركيز عينات الـحمض الريبي النووي منقوص الأوكسجين DNA المستخلص عند موجات ضوئية بطول 260 و 280 نانومتر وباستخدام جهاز المطياف الضوئي  قيماً تتراوح بين 1.85 و 1.94 وهي تشير إلى نقاوة جيدة من الـ DNA, وقدرت تراكيز عينات الـ DNA ما بين (0.26- 0.43) g/mlµ في المحلول المنظم الذي خزنت فيه هذه العينات.

وأظهرت نتائج الرحلان الكهربائي على هلامة الأغاروز لمعرفة جودة الحمض النووي DNA المستخلص, أن الحمض النووي ذو نوعية جيدة وظهر على شكل حزم أو عصابات مضيئة, سليمة أي لا يوجد تقطع أوSmear فيها.

وبينت نتائج التفاعل التسلسلي للبوليميراز PCR للكشف عن T.deformans  في 6 عينات من الفطر, أنه باستخدام شفع البادئات المتخصصة P3 / M7 أعطى حزمة من الـDNA  بوزن جزيئي, 255 bp  وباستخدام شفع البادئات المتخصصة P2 / M49 أدى إلى تضخيم  الـ DNA   بحجم

690 bp, وقد أعطى حزمة واحدة من الـDNA  بوزن جزيئي bp 550 باستخدام أشفاع البادئات المتخصصة   RPB,F-RPB,R وEF1F/EF1R .

تحميل البحث :